單克隆抗體過濾解決方案
單抗具有結(jié)構(gòu)均一、純度高、特異性強、效價高、交叉反應(yīng)少、制備成本低等優(yōu)點，已成為生物制藥業(yè)行業(yè)發(fā)展最快的領(lǐng)域之一，并成功用于治療多種癌癥、自身免疫病和其他疾病等，在生物醫(yī)藥中有重要的地位。
什么是單克隆抗體？
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單克隆抗體（monoclonal antibody, mAb）是B細胞產(chǎn)生的高度均一、僅針對某一特定抗原表位的抗體。用來鑒別和清除外源物質(zhì)如細菌、病毒等的一種“Y”形免疫球蛋白。通常，天然抗體由兩條重鏈（H鏈）和兩條輕鏈（L鏈）構(gòu)成。鏈間由二硫鍵和非共價鍵連接形成一個的單體分子。整個抗體還可進一步分為恒定區(qū)（C區(qū)）和可變區(qū)（V區(qū)）兩部分。 1、重鏈較長、相對分子量較大 2、輕鏈較短、相對分子量較小
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1、抗原（Antigen）：抗原是指能夠刺激機體產(chǎn)生（特異性）免疫應(yīng)答，并能與免疫應(yīng)答產(chǎn)物抗體和致敏淋巴細胞在體外結(jié)合，發(fā)生免疫效應(yīng)（特異性反應(yīng)）的物質(zhì)。
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單克隆抗體制備中的技術(shù)
1975年，英國科學家Kohler和Milstein 首次將壽命長但不能產(chǎn)生特異性抗體的小鼠骨髓瘤細胞與壽命短但經(jīng)免疫后可產(chǎn)生特異性抗體的漿細胞（綿羊紅細胞免疫的小鼠脾細胞）在體外進行融合(向小鼠體內(nèi)注射特定抗原以引發(fā)免疫反應(yīng)，得到相應(yīng)的B淋巴細胞，將其和小鼠骨髓瘤細胞融合，篩選后把獲得的雜交瘤細胞在體外大規(guī)模培養(yǎng)，擴增單克隆抗體)，創(chuàng)建了雜交瘤技術(shù)，得益于該技術(shù)，mAbs才實現(xiàn)了大量制備，用于基礎(chǔ)研究，并具備臨床轉(zhuǎn)化能力，開啟了單克隆抗體藥物開發(fā)的新紀元。
單克隆抗體的發(fā)展主要經(jīng)歷了4個階段
- 1、鼠源性單克隆抗體
- 2、人鼠嵌合性單克隆抗體
- 3、人源化單克隆抗體
- 4、全人源單克隆抗體
由于鼠源性抗體適用于人體時總會產(chǎn)生這樣那樣的不良反應(yīng)，因此人源化抗體才是未來藥物的發(fā)展趨向。
單克隆抗體的應(yīng)用
| 1、檢驗醫(yī)學診斷試劑：廣泛用于酶聯(lián)免疫吸附試驗、放射免疫分析、免疫組化、流式細胞等技術(shù)。并且單克隆抗體的應(yīng)用，很大程度上促進了商品化試劑盒的發(fā)展，廣泛用于抗原抗體、激素、細胞因子等的檢測。 2、蛋白質(zhì)提純：作為親和層析中的重要配體，制備成層析柱，實現(xiàn)蛋白質(zhì)的分離純化。 3、腫瘤的導向治療和放射免疫顯現(xiàn) 技術(shù)：利用單克隆抗體的導向作用，將藥物與單克隆抗體連接導向靶細胞，直接殺傷靶細胞；以及將放射性標記物與單克隆抗體連接進行放射免疫顯像。 |
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單克隆抗體過濾解決方案
單克隆抗體的生產(chǎn)工藝階段主要有：
1、上游細胞的培養(yǎng)過程；
2、細胞培養(yǎng)液的收獲和澄清過程：上游細胞培養(yǎng)完成后所獲得的含有抗體的細胞培養(yǎng)液會含有蛋白酶、宿主細胞、細胞碎片、宿主細胞蛋白、宿主細胞核酸及培養(yǎng)基與加料液成分等污染物，影響抗體的穩(wěn)定性和純度，需要經(jīng)過去除使細胞液澄清后才能用于后續(xù)的抗體分離純化過程；
3、下游分離純化過程：下游的分離純化的主要目的是將抗體與工藝相關(guān)雜質(zhì)和產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)分離，最終獲得高純度、低潛在危害的抗體藥物；
| 上游細胞的培養(yǎng)過程 |  |
| 下游工藝過程-三步層析法 |  |
單克隆抗體制備工藝流程圖
在單克隆抗體過濾的不同工藝階段都有很廣泛的應(yīng)用，主要有：培養(yǎng)基的除菌過濾、氣體的除菌過濾、緩沖液的除菌過濾、死細胞和細胞碎片的澄清過濾，超濾濃縮、層析純化、終端產(chǎn)品的除菌過濾、除病毒過濾等。
| 過濾器 | 描述 |
| 培養(yǎng)基過濾 | 去除細胞培養(yǎng)基中細菌和微生物 |
| 呼吸器/氣體過濾 | 氣體的除菌過濾主要應(yīng)用于生物反應(yīng)器的進氣及排氣過濾，各種儲罐及配料罐的呼吸器等，主要是去除氣體中的細菌等微生物 |
| ATF | 切向流過濾，去除死細胞和細胞碎片以及脂類、膠體、顆粒等雜質(zhì)去除 |
| 緩沖液過濾 | 緩沖液的除菌過濾，延長層析柱和超濾膜使用壽命 |
| 保安過濾 | 超濾前預過濾，保護超濾模組 |
| 終端除菌過濾 | 去除終端濾液中細菌和微生物 |
相關(guān)產(chǎn)品
邁博瑞在了解客戶的工藝需求后，長期為客戶提供穩(wěn)定、可靠的產(chǎn)品，并能提供完善的濾芯工藝驗證，邁博瑞公司擁有健全的工藝驗證實驗室，實驗室具有完善的管理規(guī)程、標準試驗程序和標準操作規(guī)范。為制藥企業(yè)和過濾器生產(chǎn)企業(yè)提供各種測試和驗證服務(wù)，其驗證支持服務(wù)簡化了客戶在過濾器法規(guī)方面的驗證流程，其對單克隆抗體生產(chǎn)過程主要位點過濾及應(yīng)用推薦*如下：
| 工位 | 應(yīng)用 | 推薦濾芯 |
| 培養(yǎng)基過濾 | 澄清、減菌、除菌 | 澄清過濾：5μm (MPP、PPC） 減菌過濾：0.45μm（SP、SPB） 除菌過濾：0.20μm(SPB,SPP,SPD）、MedCap-UTC-PESB、MedCap-UTC-PVL |
| 氣體、呼吸器 | 去除氣體中的細菌等微生物、平衡罐壓，防污染 | 0.2μmFBG、FSG、MedCap-UTC-PTFESG |
| ATF | 切向流，濃縮分離蛋白質(zhì) | 親水改性PES中空纖維膜 |
| 緩沖液過濾 | 預過濾、除菌過濾 | 預過濾：0.45um(PPC、SP) 除菌過濾：0.20um（SPB,SPP,SPD) |
| 柱前保安過濾 | PP材質(zhì)的超濾前預過濾，保護超濾模組 | 0.2μmSP、SPB、SPP、μmSPD |
| 除菌過濾 | PES膜，去除終端濾液中細菌和微生物 | 0.2μmSPB、SPP、SPD、MedCap-UTC-PESB、MedCap-UTC-PVL |
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【參考文獻】
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